內(nèi)切糖苷酶

- 內(nèi)切
糖苷酶從清潔制劑中的糖蛋白 - 高度穩(wěn)定的酶切割完整的聚糖 - 不含甘油，NaCl或其他添加劑，如EDTA。
- 測(cè)試所有酶不存在蛋白水解或意外的糖苷活性

內(nèi)切糖苷酶是用于分析糖蛋白的廣泛使用的酶。這些酶從糖蛋白釋放完整的聚糖，而外切糖苷酶釋放單個(gè)單糖（即唾液酸，半乳糖，β-N-乙酰基葡糖胺，甘露糖等）。

PNGase F通常包含在酶組中，因?yàn)槠淝懈钔暾腘-連接聚糖的活性相似，盡管它實(shí)際上是酰胺酶。它在天冬酰胺氨基酸和N-連接聚糖的殼二糖核心的個(gè)β-N-乙酰葡糖胺糖（GlcNAc）之間切割。Endo F酶和Endo H在和第二GlcNAc之間切割N-連接的聚糖，留下帶電荷的殘基，其有助于增加去糖基化蛋白質(zhì)的溶解度，降低蛋白質(zhì)聚集體沉淀的可能性。PNGase F切割所有N-連接的聚糖，而Endo H和Endo F酶切除特定類(lèi)型的N-連接聚糖。

酶的這種分類(lèi)還包括O-糖苷酶，其從絲氨酸或蘇氨酸氨基酸中除去核心1O-連接的聚糖（Galβ1,3GalNAcα）。O-連接的聚糖通常含有在分支和線性連接中與半乳糖連接的另外的單糖，需要使用外切糖苷酶如唾液酸酶和半乳糖苷酶來(lái)除去額外的糖。

qa-bio E-PNG01說(shuō)明書(shū)

PNGase F.

PNGase F從糖蛋白切割N-連接（天冬酰胺連接的）寡糖。

產(chǎn)品編號(hào) - 酶的量
E-PNG01 - 60μLs¹E 
-PNG01-20 - 20μLs¹E 
-PNG01-200 - 200μls²（以前的E-PNG05）
   ¹包括緩沖液，變性劑和Triton- 
   X²僅含酶

PNGase F，肽N糖苷酶F，N-糖苷酶，N-聚糖酶

PNGase F從糖蛋白切割N-連接（天冬酰胺連接的）寡糖。該酶將天冬酰胺脫氨基成天冬氨酸，使寡糖保持完整。變性增加了解理速率。大多數(shù)天然蛋白質(zhì)仍然可以*N-去糖基化，但必須增加孵育時(shí)間。酶在反應(yīng)條件（37℃）下保持*活性至少96小時(shí)。PNGase F不會(huì)去除通常在植物糖蛋白上發(fā)現(xiàn)的含有α-（1,3） - 連接的核心巖藻糖的寡糖; 為此目的，使用肽N-糖苷酶A.

有許多替代酶可用于去除N-聚糖，特別是Endo F家族的酶和Endo H.這些酶切割寡糖核心中的兩個(gè)N-乙酰氨基葡萄糖殘基，產(chǎn)生截短的糖在天冬酰胺上殘留一個(gè)N-乙酰氨基葡萄糖殘基的分子。這留下帶電荷的糖，其可以幫助將蛋白質(zhì)保持在溶液中，所述溶液在用PNGase F去糖基化后沉淀，其去除了完整的寡糖。Endo F1切割高甘露糖和一些雜合型N-聚糖。Endo F2將去除雙觸角和高甘露糖（降低40倍速率）。Endo F3釋放出triantennarry和巖藻糖基化的雙觸角N-聚糖。遠(yuǎn)藤H. 去除雜交或高甘露糖聚糖。

來(lái)源 Elizabethkingia miricola（是Chryseobacterium meningosepticum）

EC 3.5.1.52 
PDB 1PGS 
UniProt Q9XBM8

內(nèi)容
PNG酶的F的20mM的Tris-HCl，pH 7.5中

包含20μL和60μL包裝尺寸：
5x反應(yīng)緩沖液7.5 - 250 mM磷酸鈉，pH 7.5 
變性溶液 - 2％SDS，1Mβ-巰基乙醇
Triton X-100 - 15％溶液

比活力 > 25 U / mg

活性 5U / ml

分子量 36,000道爾頓

pH范圍 6-10，宜7.5

方案
1.在Eppendorf管中加入高達(dá)200μg的糖蛋白。用去離子水調(diào)節(jié)至35μl終體積。
2.加入10μl5x反應(yīng)緩沖液7.5和2.5μl變性溶液。在100°C加熱5分鐘。
很酷。加入2.5μlTritonX-100并混合。
4.向反應(yīng)中加入2.0μl酶。在37°C孵育3小時(shí)。

特異性切除所有天冬酰胺連接的復(fù)合物，雜交或高甘露糖寡糖，除非α（1-3）核心巖藻糖基化; 天冬酰胺必須在兩個(gè)末端肽結(jié)合，Endo F游離

比活性定義為在37℃，pH7.5下在1分鐘內(nèi)催化從1微摩爾變性的RNase B釋放N-連接的寡糖所需的酶量。通過(guò)SDS-PAGE監(jiān)測(cè)切割（切割的RNase B遷移更快）。

儲(chǔ)存在4°C儲(chǔ)存酶。