biochain Z7030031用戶手冊(cè)和說明

小鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞體外生長

產(chǎn)品編號(hào)：Z7030031

介紹

內(nèi)皮祖細(xì)胞（epc）是內(nèi)皮細(xì)胞系中的一種原始細(xì)胞類型。它們是骨髓來源的細(xì)胞，具有類似于胚胎血管母細(xì)胞的特性。這些祖細(xì)胞遷移到血液中，能夠分化成各種成熟的血管內(nèi)皮細(xì)胞類型。

epc在血管生成和血管生成中起著重要作用。近的證據(jù)表明

epc在腫瘤生長和轉(zhuǎn)移中的作用。epc數(shù)目的改變與淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤、lewis肺癌和肝細(xì)胞癌（hcc）有關(guān)。在各種疾病的發(fā)病機(jī)制中，包括冠狀動(dòng)脈疾?。╟ad）、缺血、肺動(dòng)脈高壓、腦血管疾病、急性心肌梗死、糖尿病、關(guān)節(jié)炎和傷口愈合中，epc的數(shù)量和功能也發(fā)生了變化。此外，epc對(duì)衰老和吸煙相關(guān)疾病有影響，提示epc在這些領(lǐng)域有潛在的應(yīng)用。

epoc的規(guī)范與表征

從7-8周齡c57/bl6小鼠骨髓中分離出生物鏈小鼠內(nèi)皮生長細(xì)胞（mepoc），并進(jìn)行體外培養(yǎng)。我們的mepoc產(chǎn)品在第9-10次傳代時(shí)作為冷凍保存或增殖細(xì)胞交付。該細(xì)胞被認(rèn)為是晚期epc，因?yàn)樗莄d 133-。每個(gè)冷凍瓶在1毫升冷凍培養(yǎng)基中含有大于5 x 10 ⁵細(xì)胞。我們的mepocs具有與內(nèi)皮祖細(xì)胞相同的紡錘狀形態(tài)。

保管部

對(duì)于冷凍保存的細(xì)胞，在接收時(shí)立即將細(xì)胞從干冰轉(zhuǎn)移到液氮中，并將細(xì)胞保存在液氮中，直到需要進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

航運(yùn)

冷凍保存的細(xì)胞在干冰上運(yùn)輸；增殖細(xì)胞在室溫下運(yùn)輸。

epoc培養(yǎng)說明

一、MEPOC生長培養(yǎng)基的制備

我們推薦使用Biochain的MEPOC生長培養(yǎng)基（CAT Z7030033）培養(yǎng)我們的MEPC。

一。在室溫水浴中解凍MEPOC生長介質(zhì)補(bǔ)充劑（CAT Z7030034）。

2.在Mepoc基本培養(yǎng)基（CAT Z7030035）的瓶子（500 ml）中加入整個(gè)體積（25 ml）的EPOC生長培養(yǎng)基補(bǔ)充劑，制備Mepoc生長培養(yǎng)基。生物鏈的mepoc生長培養(yǎng)基不含抗生素，但如果擔(dān)心污染，可以在培養(yǎng)基中添加抗生素。

三。使用前，在37°C水浴中加熱部分mepoc生長介質(zhì)。

二。解凍冷凍細(xì)胞

一。在37°C水浴中加熱EPOC生長培養(yǎng)基。

2.用70%乙醇擦拭冰凍小瓶的外部。在37°C的水浴中快速解凍冷凍細(xì)胞。

三。將細(xì)胞懸液無菌轉(zhuǎn)移到15ml試管中。用1毫升生長培養(yǎng)基沖洗小瓶，并在15毫升試管中與細(xì)胞混合。以170克（或1400轉(zhuǎn)/分）的速度離心5分鐘，使細(xì)胞沉淀。除去上清液。加入5ml新鮮小鼠epc培養(yǎng)基，置于t25燒瓶中。

四。在37℃下，用5%的二氧化碳和95%的空氣在加濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細(xì)胞。每隔一天換一次。健康的培養(yǎng)物顯示紡錘體形態(tài)，培養(yǎng)2-3天后細(xì)胞數(shù)量應(yīng)加倍。

三、亞培養(yǎng)細(xì)胞

一。當(dāng)細(xì)胞達(dá)到100%匯合時(shí)進(jìn)行繼代培養(yǎng)。

2.在通過細(xì)胞前一天更換培養(yǎng)基。

三。在37°C水浴中加熱Dulbecco的PBS、0.05%胰蛋白酶/EDTA和MEPOC生長培養(yǎng)基。

四。用Dulbecco的PBS沖洗細(xì)胞。

5個(gè)。用胰蛋白酶/EDTA溶液（1.5毫升/25平方厘米）培養(yǎng)細(xì)胞3-5分鐘，直到大約90%的細(xì)胞開始分離。輕輕地填充血管使細(xì)胞分離。

6.加入相當(dāng)于胰蛋白酶/EDTA體積1/10的胎牛血清中和胰蛋白酶，輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)管混合。

7號(hào)。輕輕地重新懸浮細(xì)胞，并將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到15ml錐形管中。

8個(gè)。在室溫下將細(xì)胞懸液在170 x g下離心5分鐘。

9號(hào)。小心地去除上清液，不要干擾細(xì)胞顆粒。在生長培養(yǎng)基中重新懸浮細(xì)胞。

10個(gè)。將它們按1:5的比例放入新的培養(yǎng)皿中。

11號(hào)。在37℃下，用5%的二氧化碳和95%的空氣在加濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細(xì)胞。每隔一天換一次。

iv.在充滿mepoc生長培養(yǎng)基的t25、t75、t125和t225燒瓶中提供增殖性epoc增殖性epoc。

當(dāng)燒瓶到達(dá)時(shí)：

一。從燒瓶中倒出大部分培養(yǎng)基，并在燒瓶中留適量。

2.在37℃下，用5%的二氧化碳和95%的空氣在加濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細(xì)胞。第二天換成中號(hào)，以后每隔一天換一次。健康的培養(yǎng)基在培養(yǎng)2-3天后，紡錘形細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞數(shù)量應(yīng)加倍。

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References

1. Asahara T, Murohara T, Sullivan A, Silver M, van der Zee R, Li T, Witzenbichler B, Schatteman G and Isner JM (1997). Isolation of putative progenitor endothelial cells for angiogenesis. Science. 275:964-967.

2. Gupta M (2007). Circulating endothelial cells and circulating endothelial cell progenitors as surrogate markers for determining response to antiangiogenic agents. Clin Colorectal Cancer 6(5):337-338.

3. Gao D, Nolan DJ, Mellick AS, Bambino K, McDonnell K, Mittal V. Endothelial progenitor cells control the angiogenic switch in mouse lung metastasis. Science. 2008 Jan 11; 319(5860):195-8.