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fivephoton TMPER-200說明書
跨膜蛋白提取試劑 （質膜蛋白分離） 零件 tmper-200。100 毫升體積。 適用于300個10cm的匯合細胞培養(yǎng)皿。根據培養(yǎng)皿的表面積，體積可擴展到其他尺寸的培養(yǎng)皿。
跨膜蛋白提取 FIVEphoton Biochemicals 跨膜蛋白提取試劑 (tmPER-200 TM ) 是一種細胞裂解蛋白提取緩沖液，含有專有成分，有助于提取和分離高分子量跨膜蛋白，否則由于聚集趨勢、脂筏結合或其他不溶性問題，這些蛋白在標準細胞裂解緩沖液中很難分離。Transmembrane Protein Extraction Reagent 旨在提取具有 4 個或更多跨膜結構域的蛋白質，同時也能有效分離不太復雜的跨膜蛋白質。FIVEphoton Biochemicals 跨膜蛋白提取試劑的適用性示例包括在蛋白質印跡下游應用中提高 ABC 轉運蛋白、離子通道、離子交換器和 GPCR 的分辨率。 跨膜蛋白提取試劑：通用方案 研究人員首先采用協議手冊中描述的技術來限制內吞作用和溶酶體靶向，否則可能導致多膜跨越蛋白的細胞質域的蛋白水解切割。在第二步中，加入添加了蛋白酶抑制劑的跨膜蛋白提取試劑以從細胞培養(yǎng)皿中去除細胞并溶解細胞膜。膜溶解后，使用短暫離心從含有提取的跨膜蛋白的上清液中去除細胞碎片。在 SDS-PAGE 凝膠中拆分之前，將上清液加入 Laemmli 樣品緩沖液中，加熱但未煮沸。對于蛋白質印跡，轉移發(fā)生在添加了 SDS 和少量甲醇的轉移緩沖液中。
圖例。野生型 (WT) 和 deltaF508 CFTR，一種 12 TM 結構域蛋白，由 MDCK 細胞中的腺病毒感染表達，并用跨膜蛋白提取試劑提取。WT CFTR 揭示了一個 170 kD 的上帶，反映了復雜的糖基化，以及一個核心糖基化帶。相比之下，deltaF508 CFTR 的運輸受損，保留在內質網中，因此僅與核心糖基化帶合成。運輸障礙是囊性纖維化的根本原因。 圖標圖像： CFTR 在 HEK293 細胞中穩(wěn)定表達并用跨膜蛋白提取試劑提取。捕獲核心和復雜糖基化的野生型變體的蛋白質印跡。
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